紫外分光光度計的組成、原理和應用

紫外分光光度計組成： 

  各種型號的紫外－可見分光光度計，就其基本結(jié)構(gòu)來說，都是由五個基本部分組成，即光源、單色器、吸收池、檢測器及信號指示系統(tǒng)。

1.光源 

在紫外可見分光光度計中，常用的光源有兩類：熱輻射光源和氣體放電光源。         

熱輻射光源用于可見光區(qū)，如鎢燈和鹵鎢燈；氣體放電光源用于紫外光區(qū)，如氫燈和氘燈。 

2．單色器 

單色器的主要組成：入射狹縫、出射狹縫、色散元件和準直鏡等部分。 

單色器質(zhì)量的優(yōu)劣，主要決定于色散元件的質(zhì)量。色散元件常用棱鏡和光柵。 

3.吸收池 

吸收池又稱比色皿或比色杯，按材料可分為玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外區(qū)。吸收池的種類很多，其光徑可在0.1~10cm之間，其中以1cm光徑吸收池zui為常用。 

4、檢測器 

檢測器的作用是檢測光信號，并將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枴，F(xiàn)今使用的分光光度計大多采用光電管或光電倍增管作為檢測器。 

5、信號顯示系統(tǒng) 

常用的信號顯示裝置有直讀檢流計，電位調(diào)節(jié)指零裝置，以及自動記錄和數(shù)字顯示裝置等。

紫外分光光度計基本原理： 

分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息，可以用標準光譜圖再結(jié)合其它手段進行定性分析。 

朗伯-比爾定律：當一束平行單色光通過含有吸光物質(zhì)的稀溶液時，溶液的吸光度與吸光物質(zhì)濃度、液層厚度乘積成正比，即A= kcl 

   式中比例常數(shù)k與吸光物質(zhì)的本性，入射光波長及溫度等因素有關(guān)。c為吸光物質(zhì)濃度，l為透光液層厚度。 

紫外分光光度計應用： 

分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸、蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。我們實驗室主要是用來測物質(zhì)的光度以求得物質(zhì)的濃度或者酶活。